结直肠癌（colorectal cancer, CRC）是一种始于结肠或直肠的癌症，是世界上最常见的癌症类型之一。据统计，超过一半的CRC患者发生转移，即癌细胞从原发部位扩散到身体的其他部位。转移是治疗CRC的一个重大挑战。上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）被证实在肿瘤发生和侵袭转移中起关键作用，深入了解EMT在CRC中的应用对于开发有效的疗法以及改善患者预后至关重要。

Hormonally Up-Regulated Neu-Associated Kinase（HUNK）是一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，调节癌细胞的存活、增殖和转移。既往对其研究具有争议，HUNK在乳腺癌中通过独立或依赖HUNK激酶的方式，传导多种信号通路促进或抑制癌细胞转移。在CRC中，HUNK是否参与转移及其潜在机制尚不清楚。

2023年5月16日，澳门网上赌搏平台和中大医院双聘高山教授团队在Cell Death & Disease杂志在线发表题为HUNK inhibits epithelial-mesenchymal transition of CRC via direct phosphorylation of GEF-H1 and activating RhoA/LIMK-1/CFL-1的研究论文。

该工作首先基于CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除HUNK，研究人员观察到，对比野生型细胞，敲除HUNK的细胞发生间质样形态转变，结合RNA表达谱分析，暗示HUNK抑制EMT。基于该现象，研究人员通过检测EMT标志物以及细胞体外、体内转移能力，发现HUNK缺失诱导CRC的EMT并促进转移。进一步，研究人员鉴定到HUNK结合分子鸟嘌呤核苷酸交换因子H1 (GEF-H1)，其有助于小G蛋白上的鸟苷二磷酸（GDP）和鸟苷三磷酸（GTP）相互转换，从而活化Rho等小G蛋白的一类蛋白质家族，既往研究报道，GEF-H1促进RhoA活性，并通过一系列磷酸化LIM结构域激酶(LIMKs)/丝切蛋白(cofilin-1，CFL-1)途径来稳定丝状肌动蛋白(F-actin)，抑制细胞EMT。因此，研究人员通过检测RhoA活性和信号通路分子表达水平，以及对该通路效应分子CFL-1进行表型挽救实验，发现HUNK通过RhoA/LIMK-1/ CFL-1信号通路调控CRC的EMT。HUNK作为丝氨酸/苏氨酸激酶，研究人员通过定点氨基酸突变技术，验证了HUNK通过其激酶活性发挥抑制CRC的EMT功能，并且通过定量磷酸化蛋白组学分析联合标记串联质谱法和定制磷酸化抗体检测，验证了HUNK直接磷酸化GEF-H1的第645位丝氨酸负调控CRC的EMT（图1）。进一步，研究人员通过HUNK抑制剂Staurosporin（STS）加强支持了以上结论。最后，研究人员通过GEO数据及CRC病人临床样本，与未发生转移的CRC组织相比，有转移的CRC组织中HUNK和GEF-H1第645位丝氨酸磷酸化表达水平均下调，且呈正相关。总结来说，此项工作揭示了一个以HUNK/GEF-H1/RhoA/LIMK-1/ CFL-1轴调控CRC的EMT，且HUNK直接磷酸化GEF-H1第645位丝氨酸。该研究为CRC临床诊疗的新策略和新靶点提供了一定的理论基础，具有潜在的科学意义与临床应用价值。

澳门网上赌搏平台生科院联培硕士生韩晓琦为该论文的第一作者，高山教授为该论文的最后通讯作者。

图1：HUNK/GEF-H1轴抑制CRC的EMT模式图

原文链接： https://doi.org/10.1038/s41419-023-05849-2